Молекулярная Патогистология


Цели использования молекулярных методов


Молекулярные методы используются в патогистологии для разных целей.

Применяется для диагностики опухолей или инфекционных заболеваний с помощью соответствующих тестов после морфологической оценки компетентного патогистолога и для определения подтипов опухолей. Морфологические и молекулярные исследования постепенно стали неотъемлемой частью друг друга в диагностике, наблюдении и лечении онкологических пациентов. Настолько, что названия некоторых опухолей (опухоли головного мозга и различные саркомы) были изменены путем сравнения молекулярных методов и морфологии, и были созданы новые диагностические группы.
При наличии или отсутствии мутации в раковых тканях возможно использование таргетной терапии. Обнаружение наличия или отсутствия этих мутаций производится с помощью тестов, применяемых в молекулярной патогистологии. Например; Тесты EGFR, ALK, ROS1 при раке легких, тесты KRAS, NRAS, BRAF при раке толстой кишки / кишечника, тест Her2 при раке груди и раке желудка, тест BRAF при раке щитовидной железы и раке кожи входят в число стандартных тестов онкологии.
Хотя течение заболевания сильно зависит от личных причин, необходимо знать возможное течение заболевания для надлежащего лечения пациента. Поэтому некоторые молекулярные методы используются онкологами. Например, тесты MSI (микросателлитная нестабильность), которые указывают на вероятность наследственного рака при раке матки, теперь регулярно проводятся при патогистологическом исследовании.

Методы, используемые в молекулярной патогистологии

Подобно иммуногистохимическим исследованиям, ежедневно используемым в патогистологической практике, мутационно-специфическая иммуногистохимия позволяет определять белковые структуры, возникающие при мутации. Поскольку она быстрая и практичная (например, BRAF при раке щитовидной железы и кожи, IDH1 при опухолях головного мозга), данный метод используется для обнаружения некоторых мутаций.
Это тесты, выполняемые с использованием специальных противоположных (комплементарных) ДНК и РНК, которые связываются с ДНК или РНК в клетках. ISH используется при обнаружении вирусов (EBER при различных лимфомах, HPV при раке шейки матки), обнаружении очага опухоли (альбумин в печени), обнаружении изменений хромосом (потеря 1p19q при опухолях головного мозга, слияние BCR-ABL в некоторых лимфомах) и обнаружении увеличения экспрессии генов (HER2 при раке молочной железы и желудка, EGFR).
FlSH (Флуоресцентная гибридизация in-situ):
Это гибридизационные исследования in-situ, выполняемые с использованием специальных наборов флуоресцентного излучения и специальной флуоресцентной микроскопии.
CISH (Хромогенная in-situ гибридизация): Это исследования, позволяющие проводить гибридизацию in-situ с помощью световой микроскопии.
Полимеразная цепная реакция (Polymerase Chain Reaction) - это процесс воспроизведения ДНК или РНК, полученных из ткани в лаборатории. В течение определенного количества репликации, при наличии мутации, образуется достаточное количество новой ДНК или РНК, и выявляется наличие мутаций (например, тесты KRAS, NRAS, BRAF при раке толстой кишки/кишечника).
Мутации, наблюдаемые в опухолях, очень разнообразны. Некоторые мутации являются основным фактором размножения опухоли, в то время как другие остаются только поврежденными и не влияют на поведение (биологию) опухоли. Эти мутации-водители (driver), которые влияют на поведение опухоли, и мутации-пассажиры (passenger), не влияющие на поведение, различаются с точки зрения диагностики, лечения и выживания. По этой причине в молекулярной патогистологии используются анализы, специфичные для выбранных мутаций (анализы точечных мутаций), которые могут напрямую определять поведение опухоли.
Это анализ, сделанный путем считывания оснований в последовательности ДНК одно за другим. Таким образом определяется, с каким изменением произошла мутация, и соответственно производится выбор диагноза и лечения.
Все мутации в опухоли можно обнаружить с помощью секвенирования нового поколения, основанного на одновременном считывании нескольких образцов ДНК. NGS используется для обнаружения мутаций, которые не часто наблюдаются в опухоли, но имеются лекарства для лечения, особенно у пациентов на поздних стадиях и которые завершили свое первое лечение. Система, которая находится в ограниченном количестве центров в Турции, используется в генетической лаборатории Memorial, аккредитованной по стандарту ISO 15189.
Повреждения, вызывающие изменения в ДНК, называются мутациями. Мутации происходят почти в каждом клеточном делении, и почти все они восстанавливаются. Эти мутации накапливаются, потому что раковые клетки растут очень быстро, и их механизмы восстановления не могут внести коррекцию. Мутационная нагрузка, полученная посредством соотношения мутационного накопления к общему количеству ДНК, недавно начала применяться в лечении. Чем больше мутаций в опухоли (например, при раке кожи/меланоме), тем больше чужеродных антигенов будет продуцироваться, и эти опухоли будут лучше реагировать на иммуномодулирующие методы лечения (тесты PD1-PDL1, используемые при многих типах рака, особенно при раке легких).